免疫血清的制備是一項(xiàng)常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)
更新時(shí)間：2020-07-07 點(diǎn)擊次數(shù)：2111次
免疫血清的制備是一項(xiàng)常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。價(jià)、高特異性的免疫血清可作為免疫學(xué)診斷的試劑(如用于制備免疫標(biāo)記抗體等)，也可供特異性免疫治療用。
免疫血清的效價(jià)高低取決于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫反應(yīng)性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強(qiáng)的抗原刺激高應(yīng)答性的機(jī)體，常可獲得價(jià)的免疫血清。
一、免疫方法
根據(jù)抗原的性質(zhì)不同而異。下面以制備家兔抗人IgG免疫血清為例作具體說(shuō)明。
1.用剪刀剪去家兔兩后腳掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮膚;
2.次免疫：用2ml注射器吸取弗氏*佐劑(FCA)乳化的抗原(人IgG)下稱FCA-IgG)液1ml，每側(cè)腳掌皮下各注入0.5ml。
3.第二次免疫：間隔10-14天后，于兩側(cè)窩及鼠蹊部腫大的淋巴結(jié)內(nèi)注入FCA-IgG，每個(gè)淋巴結(jié)注0.1ml，其余注入淋巴結(jié)附近皮下共1ml。如淋巴結(jié)未腫大或腫大不明顯時(shí)，直接注入兩側(cè)窩及鼠蹊部皮下。
4.間隔7-10天后，從耳靜脈采血0.5~1.0ml，分離血清，以雙相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)測(cè)定免疫血清的抗體效價(jià)(即試血)。效價(jià)至少應(yīng)達(dá)到1∶16以上時(shí)才能放血。
5.若效價(jià)未達(dá)到要求，可用不加佐劑的抗原液(人IgG)耳靜脈內(nèi)注射免疫。即于1周內(nèi)注射3次，分別為0.1、0.3、0.5ml。間隔1周再試血。如效價(jià)達(dá)到要求應(yīng)立即放血。另外，也可在第2次免疫后，以弗氏不*佐劑(FIA)乳化的抗原(人IgG)(簡(jiǎn)稱FIA-IgG)再免疫1-2次。注射部位、劑量和間隔均同第2次，再試血測(cè)抗體效價(jià)，如效價(jià)達(dá)到要求立即放血。
二、放血
(一) 心臟采用血法
1.家兔仰面，四肢縛于動(dòng)物固定架上(或由助手抓住四肢固定);
2.剪去左胸部兔毛，消毒皮膚;
3.用左姆指摸到胸骨劍突處，食指及中指放在右胸處輕輕向左推心臟，并使心臟固定于左胸側(cè)位置。然后，以左拇指觸摸心臟搏動(dòng)*的部位;
4.用50ml注射器(連接16號(hào)針頭)，傾針45°角度，對(duì)準(zhǔn)心搏*處刺入心臟抽血致死;
5.將抽取的血液立即注入無(wú)菌三角燒瓶中，待凝固后分離血清。
(二) 頸動(dòng)脈放血法
1.家兔仰臥同上固定。頭部略放低以暴露頸部。剃毛及消毒皮膚;
沿頸部中線切開(kāi)皮膚約10cm，分離皮下組織，直至暴露出氣管兩側(cè)的胸鎖乳突肌;
3.分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區(qū)疏松組織，暴露出頸總動(dòng)脈后使之游離;
4.于動(dòng)脈下套入兩根黑絲線，分別置于遠(yuǎn)心及近心端。結(jié)扎遠(yuǎn)心端的絲線。近心端的動(dòng)脈用血管夾夾住;
5.用尖頭小剪刀在兩根絲線間的動(dòng)脈璧上剪一小口，插入塑料放血管。再將近心端的絲線結(jié)扎固定于放血管上，以防放血管滑脫;
6.松開(kāi)血管夾，使血液流入滅菌三角燒瓶中。一般一只家兔可放血80~100ml。
三、分離血清
將三角燒瓶的血置37℃溫箱1小時(shí)，再置4℃冰箱內(nèi)3~4小時(shí)。待血液凝固血*收縮后，用毛細(xì)滴管吸取血清。于3000rpm離心15分鐘，取上清加入防腐劑(0.01%硫柳汞或0.02%疊氮鈉，終濃度)，分裝后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/div>
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