lncRNA熒光定量檢測試劑盒
與 mRNA 相比，lncRNA 具有豐度低、GC含量差異大、二級結構更復雜等特性，傳統定量試劑對 lncRNA 難以達到理想的效果。本試劑盒中的 2× Universal lncRNA SYBR qPCR Mix是專門為 lncRNA 定量檢測而研發的新一代預混形式的熒光定量 PCR 檢測試劑，其中的DNA Polymerase 采用的是抗體修飾的熱啟動形式lncRNA熒光定量檢測試劑盒
lncRNAqPCR Kit (SYBR Green)
lncRNA 熒光定量檢測試劑盒 (SYBR Green)
lncRNA熒光定量檢測試劑盒
目錄號:71503
產品內容
Components | P503-500 500rxns(20μl/rxn) | P503-2500 2500rxns(20μl/rxn) |
2x Universal lncRNA SYBR qPCR Mix | 1 ml x5 | 1 ml x25 |
保存條件
-20℃保存，有效期 24 個月。使用前，充分融解，輕輕顛倒混勻，短期使用可放在 4 ℃，避免反復凍融。
產品簡介
與 mRNA 相比，lncRNA 具有豐度低、GC含量差異大、二級結構更復雜等特性，傳統定量試劑對 lncRNA 難以達到理想的效果。本試劑盒中的 2× Universal lncRNA SYBR qPCR Mix是專門為 lncRNA 定量檢測而研發的新一代預混形式的熒光定量 PCR 檢測試劑，其中的DNA Polymerase 采用的是抗體修飾的熱啟動形式，確保本產品在保證較高的反應特異性的情況下具有更高的檢測靈敏度。此外，Buffer 中添加了的 H-competitor 因子和 EP 組分，使得本產品具有廣泛的樣本普適性，對不同GC含量的模板、具有復雜高級結構的模板、PCR 抑制劑殘留較多的模板以及長片段模板等具有非常好的擴增適用性，特別適合高級結構相對復雜，整體豐度相對較低的 lncRNA 的定量檢測。
預混液中含有通用型ROX，適用于所有qPCR儀，使用qPCR Mix時不需要額外添加ROX來校正儀器。
操作步驟：
1. 將DNA模板、引物、2 x Universal lncRNA SYBR qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。
2. 冰上配制qPCR反應體系：（以20μl反應體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2 x Universal lncRNA SYBR qPCR Mix | 10 μl | 1× |
cDNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
注意：
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應體系，cDNA原液≤總反應體系的10%。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數不同，可對模板進行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量。
2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM，就可以得到較好的結果，反應效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內進行調整。
擴增效率不高的情況下，可提高引物濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優化反應體系。
3. qPCR反應程序
注意：
1） 本產品兼容性強，絕大多數情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來說，二步法擴增特異性高，三步法擴增效率高。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴增或提高退火溫度；如果因使用Tm 值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結果時，可嘗試加長延伸時間或者進行三步法PCR擴增。
2） 根據引物的Tm值進行退火&延伸（退火）溫度的設定；
3） 延伸（退火&延伸）時間的設置還需要根據您所使用的qPCR儀所需要的最短數據采集時間自行調整。
4） 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進行設定。
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